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  • DNA的特性及應(yīng)用

    [ 蘭紹江 ]——(2005-4-13) / 已閱19842次

    《DNA的特性及應(yīng)用》

    關(guān)鍵詞:DNA 法醫(yī)物證

    在刑事案件的偵破工作中,常常要檢驗血痕、精斑、唾液等現(xiàn)場遺留物的血型物質(zhì)是哪個種屬,并同嫌疑人進行對照、比較,確認異同。這種血型鑒定是法醫(yī)物證檢驗中最常用的技術(shù)手段。
    最早意義上的血型僅指血紅細胞表面抗原的四種類型(A、B、AB、O)。當今血型檢驗的系統(tǒng)己經(jīng)大大擴展,可以在刑事技術(shù)部門實際應(yīng)用的血斑檢驗系統(tǒng)15-20個,精班檢驗系統(tǒng)5一6個(均含血型、血清型和酶型系統(tǒng))。譬如,設(shè)在倫敦的國際刑警組織實驗室常規(guī)檢驗血液項目為13項,檢驗精液項目為5項,因而排除嫌疑的比率明顯增大。但是,各檢驗項目的聯(lián)合排除率并不等于各項目獨立排除率的簡單相加,而是:P=l-l(l-P1)(l-P2)…… (l-Pn)。其中,Pl、P2……Pn分別代表各獨立血型系統(tǒng)的排除率,P為聯(lián)合排除率。從理論上可以看出,盡管檢驗項目擴展,但最終不能達到同一認定的目的。而DNA檢驗技術(shù),則解決了這個關(guān)鍵問題。
    法醫(yī)物證的DNA檢驗技術(shù)是本世紀80年代中期才開始研究和應(yīng)用的,它借助了新興的"分子生物學(xué)"和"遺傳工程學(xué)"的理論與技術(shù)。早在19世紀60年代,奧地利遺傳學(xué)家孟德爾在運用數(shù)學(xué)方法對植物遺傳性狀進行多年分析研究的基礎(chǔ)上,提出了著名的孟德爾遺傳定律,預(yù)言了遺傳因子的存在。到20世紀40年代,美國學(xué)者艾弗里等人證明了遺傳因子就是脫氧核糖核酸。1953年,美國生物學(xué)家沃森(Jams Watson)和英國物理學(xué)家克里克(Francis Crick)發(fā)現(xiàn)并提出了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)理論與堿基配對原則,開創(chuàng)了分子生物學(xué)。1989年,美國科學(xué)家用"掃描隧道顯微鏡"直接觀察到了脫氧核糖核酸的雙螺旋結(jié)構(gòu)。1990年,我國青年科學(xué)家白春禮用自己研制的"掃描隧道顯微鏡"首次觀察到人們尚未認知的三鏈狀脫氧核糖核酸,為生命信息研究又辟新途。在60年代,經(jīng)過許多科學(xué)家的共同努力,破譯了遺傳物質(zhì)中的全部密碼,使人類對遺傳物質(zhì)的認識進入了新的階段;1973至1974年,美國斯坦福大學(xué)的科恩博士在實驗室運用重組DNA的方法,改變了生物的遺傳信息,也改變了生物的遺傳性狀,開創(chuàng)了遺傳工程學(xué)。1985年,英國萊斯特大學(xué)三名遺傳學(xué)家亞歷克·杰費里斯(Alec Jeffroys)、彼得·吉爾(Peter Gil1)、戴維·沃雷特發(fā)現(xiàn)每個人的DNA分子中,堿基的排列都是獨特的。事實上,除了同卵雙生子的DNA結(jié)構(gòu)有相同的可能性之外,沒有任何兩個人存在相同的DNA。這一重大發(fā)現(xiàn)立刻引起法醫(yī)學(xué)界的高度重視,各國紛紛投向這一領(lǐng)域的研究。英國首先在移民糾紛中應(yīng)用DNA檢驗手段確認母子親緣關(guān)系。

    DNA是脫氧核糖核酸的英文(DoXyribo Nucleic Acid)縮寫。它是在生物細胞核中普遍存在的大分子聚合物。它具有"自我復(fù)制"及"互補合成RNA(核糖核酸)"二項功能,使生物體的遺傳性狀得以在新生體上體現(xiàn),因而被稱為"遺傳基因"。DNA的化學(xué)組成包括磷酸(P)、脫氧核糖(S)和四種含氮堿基:腺嘌呤脫氧核苷酸(dAmp)、鳥嘌呤脫氧核苷酸(dGmp)、胞嘧啶脫氧核苷酸(dCmp)、胸腺嘧啶脫氧核苷酸(dTmp)。DNA的分子結(jié)構(gòu)為兩條平行但方向相反的多個核苷背酸聚合長鏈,圍繞一個中心軸相對旋轉(zhuǎn)成雙螺旋狀(見圖一)

    每條長鏈的外側(cè)排列著磷(P)和脫氧核糖(S),內(nèi)側(cè)排列的四種堿基依照A=T、T=A、G=C、C=G的對應(yīng)關(guān)系由氫鍵連接,使雙鏈成一整體。在不同的DNA分子中,S與P的排列結(jié)構(gòu)是相同的(一S一P一S一P一),但堿基的排列順序不同。DNA分子中的堿基雖只四種,但由氫鍵連接的堿基對的數(shù)目少則幾千,多則數(shù)萬,組成極多的不同排列順序。這就構(gòu)成了DNA分子結(jié)構(gòu)的多樣性,從理論上解決了同一認定問題。
    DNA分子的復(fù)雜結(jié)構(gòu)具有三個重要特性:(1)人各不同;(2)終生不變;(3)同一人體各不同部位細胞中的DNA結(jié)構(gòu)相同。法醫(yī)物證檢驗正是利用了這些可貴特性,依據(jù)攝取的DNA結(jié)構(gòu)圖譜進行個體識別。這同利用指紋進行個體別的準確性相同,因而又被稱為"DNA遺傳指紋圖譜"。

    目前,各國專家一般采用化學(xué)方法分離DNA,再用特殊的DNA探針檢驗,可以獲得代表每個人獨特基因組的DNA圖譜。其程序包括七個環(huán)節(jié):
    1、提取。先將DNA從檢材細胞核中提取出來。不同檢材的性質(zhì)不同,提取和純化DNA的方法也不完全相同。如對精液與陰道分泌物混合的檢材:先裂解、洗滌,清除女性物質(zhì)后,獲得純精子,再裂解取出DNA.
    2、酶解。由特定的限制性內(nèi)切酶裂解DNA分子長鏈。由于每個人DNA分子中堿基排列呈現(xiàn)多樣性,所以酶切堿基后,就獲得在數(shù)量和長度上體現(xiàn)個體差異的若干DNA片段。
    3、電泳。瓊脂糖凝膠是一層充滿網(wǎng)孔的膠狀物,在電泳時,其一端為正極,另一端為
    負極。DNA片段帶負電,當將它加在凝膠負極板后,就會向正極緩慢泳動,泳動速度和距
    離取決于片段長度大小。經(jīng)過一段時間,DNA片段按長短順序排列開來。
    4、轉(zhuǎn)移。經(jīng)電泳展開的DNA片段通過吸印或真空轉(zhuǎn)移法,轉(zhuǎn)移并固定到硝酸纖維素
    膜或尼龍膜上。
    5、探針標記與雜交。所謂探針標記,就是使用專門的特殊試劑,經(jīng)過特定的反應(yīng),在不破壞DNA排列結(jié)構(gòu)的前提下,使DNA片段能產(chǎn)生放射線(同位素探針),或顯色發(fā)光(非同
    位素探針),從而可以識別DNA片段。
    標記好的探針需與附著有DNA片段的轉(zhuǎn)移膜溫育,才能結(jié)合,這個過程叫"雜交"。雜交后清洗未結(jié)合的多余探針。
    6、顯影。將雜交好的膜與X光感光片重合放在暗盒內(nèi)感光,再經(jīng)顯影、定影,即得到
    DNA圖譜。
    7、檢驗。將檢材DNA圖譜與嫌疑樣本DNA圖譜進行譜帶比較。一般若有15條以上譜帶相同,又不存在差異(不吻合譜帶),則可做認定結(jié)論。但現(xiàn)場檢材會由于各種客觀原因,使DNA圖譜不完整,所以用15條以上譜帶完全吻合為標準是不現(xiàn)實的。據(jù)觀察統(tǒng)計:每個個體平均具有的譜帶數(shù)16·8條,兩個不相關(guān)的個體間具有一條相同譜帶的概率為0·21,具有二條相同譜帶的概率為(0·21)2,如果現(xiàn)場檢材DNA圖譜有5條以上譜帶與樣本吻合,則個人認定的準確率達到99.96%以上。這時,如果沒有發(fā)現(xiàn)其他差異點,可以作認定結(jié)論。如果檢材的譜帶在5條以下,即使全能與樣本吻合,亦只能做可能性(或然)認定。如果檢材與樣本的譜帶不同,則做否定結(jié)論

    DNA檢驗在刑事案件偵破工作中的意義包括:
    (1)在強奸及輪奸案件中,依據(jù)精細胞DNA認定犯罪人。在輪奸案件中,幾個人的精液混合后的分離技術(shù),目前并沒解決,因而血型鑒定的難度很大。但DNA檢驗可以解決這個難題:將所有嫌疑人的精液或血液樣本采來與現(xiàn)場檢材比對,如果嫌疑人中的確有犯罪分子,則必然會認定其一,同時又不能籍以否定其他人。
    (2)在碎尸案件中收集到的尸塊組織,以DNA檢驗來判定是否為同一人。
    (3)按遺傳規(guī)律,親子的DNA分別繼承其雙親。如果孩子DNA圖譜有一半與母親相同,另一半與嫌疑父親相同,則認定其為生父。因此,DNA檢驗對于拐賣兒童、強奸致孕等案件中的生父認定,具有極重要意義,這也是目前國際上認可、且不能為其他方法替代的手段。
    (4)在殺人案件中,從現(xiàn)場血液或血痕DNA圖譜認定犯罪人,或確認為受害人所留。
    (5)在無名尸案件中認定身源。對面目全非,其他方法無法辯認的尸塊,可以通過DNA檢驗與失蹤人(受害嫌疑人)的父母的DNA圖譜對照,確認身源。
    (6)其他。如若干起強奸案通過精斑DNA檢驗進行并案;在移民爭端中進行血緣關(guān)系的審查;在汽車肇事案中對車輛上附著的人體組織進行檢驗等。
    此外,加拿大專家應(yīng)用Y一染色體特異性DNA探針可以將不同性別的人血加以區(qū)分;又用重復(fù)序列DNA探針將人血和動物血進行區(qū)分。各國專家認為,DNA技術(shù)開創(chuàng)了法醫(yī)物證檢驗的嶄新天地,是法醫(yī)生物學(xué)發(fā)展的方向。

    由于DNA分子在外界環(huán)境的影響下會發(fā)生降解作用,減少其譜帶數(shù)量,所以對檢材和樣本的提取有較嚴格的要求,一般以人腦組織、深層肌肉組織和液體血為佳。
    ①在強奸案件中,提取現(xiàn)場精斑、混合斑為檢材。如果是輪奸案,應(yīng)盡量多收集現(xiàn)場各
    不同部位的精斑并分別記錄和保存,減少不同人精液混合的概率。
    ②在奸殺案件中,提取精斑和陰道擦拭棉球為檢材,取受害人腦組織或深層肌肉為樣本,以備與嫌疑人和受害人分別作鑒別區(qū)分。
    ③在碎尸案中,如需認定不同尸塊是否為同一人時,按DNA降解的難易順序(腦、深層肌、心、肺、脾、肝)提取檢材。
    ④殺人案中,提取現(xiàn)場及嫌疑人衣物上的血液、血斑為檢材,提取受害人液體血、腦組織為樣本。
    ⑤現(xiàn)場帶毛囊的毛發(fā)、沾有唾液的煙頭等亦可作為檢材。
    ⑥對受審查嫌疑人,應(yīng)提取其液體血為樣本。
    DNA檢驗技術(shù)對于提取檢材和樣本的數(shù)量及保存亦有嚴格要求:液體血取3m1以上,加抗凝劑(枸櫞酸鈉),密封在冰壺中保存送檢。
    各種組織提取5克以上,密封,在一2O0C保存。
    各種斑跡提取后,陰干,一2O0C保存。
    帶毛囊的毛發(fā)及煙頭檢材,亦應(yīng)陰干,在一2O0C保存。
    各種檢材、樣本提取后及時送檢。

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